Отсутствие значительных вариаций сплайсинга вне мишени с вектором U7snRNA, нацеленным на дупликации экзона 2 гена дистрофина

01 августа 2021

Терапия пропуска экзона для мышечной дистрофии Дюшенна, которая восстанавливает открытую рамку считывания, может быть проведена с использованием некодирующей малой ядерной РНК U7 (U7snRNA), модифицированной антисмысловой последовательностью, направленной на экзон, доставляемой вектором аденоассоциированного вируса (AAV). Мы разработали вектор AAV (AAV9.U7-ACCA), содержащий четыре U7snRNA, нацеленные на донорные и акцепторные сайты сплайсинга экзона 2 дистрофина, что привело к высокоэффективному исключению экзона 2 гена дистрофина. Мы оценили специфичность вариаций сплайсинга, индуцированных AAV9.U7, доставляемом -ACCA, в модели мышей с дупликацией экзона 2 Dmd (Dup2) с помощью беспристрастного подхода RNA-seq. Связанные с лечением эффекты на сплайсинг пре-мРНК количественно оценивали с помощью анализа локальных вариаций сплайсинга (LSV). Фильтрация транскриптома на предмет различий в связанном с лечением сплайсинге привела только к 16 кандидатам в LSV, не являющимся мишенями. Только один кандидат вне мишени LSV был обнаружен как в ткани скелетных, так и в сердечных мышцах и обнаружен в известном вариабельном экзоне. Напротив, четыре LSV представляли значительную коррекцию сплайсинга экзона 2 Dmd, а анализ транскриптома показал коррекцию известной дисрегуляции гена с дефицитом дистрофина. Мы пришли к выводу, что отсутствие сплайсинга вне мишени, индуцированного обработкой вектором U7-ACCA, поддерживает дальнейшее клиническое развитие этого подхода.


https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/

Архив новостей