Высокопроизводительный скрининг выявляет модуляторы саркоспана, которые стабилизируют мышечные клетки и проявляют активность у мышиной модели мышечной дистрофии Дюшенна

30 сентября 2020
Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) - дегенеративное мышечное заболевание, вызванное мутациями в гене дистрофина. Потеря дистрофина предотвращает образование связи между мембраной мышечной клетки и внеклеточным матриксом. Сверхэкспрессия саркоспана (SSPN) у мышиной модели МДД восстанавливает мембранную связь и снижает тяжесть заболевания, что делает SSPN многообещающей терапевтической мишенью для фармакологической активизации.
Методы: Используя ранее описанный клеточный анализ промотора экспрессии гена SSPN (hSSPN-EGFP), мы провели высокопроизводительный скрининг библиотек из более чем 200 000 тщательно отобранных малых молекул для выявления модуляторов SSPN. Отбор по попаданию проводили на мышиных и человеческих миофибриллах с дефицитом дистрофина с оценкой экспрессии гена SSPN с использованием количественной ПЦР и (2) экспрессии белка SSPN с использованием иммуноблоттинга и ELISA. Анализ стабильности мембраны при помощи осмотического шока был использован для подтверждения функциональных эффектов лечения с последующим биотинилированием клеточной поверхности для метки белков клеточной поверхности. Мышей MDX с дефицитом дистрофина лечили соединением, а мышцы подвергали количественной ПЦР для оценки экспрессии гена SSPN.
Результаты: мы идентифицировали и проверили основные соединения, которые увеличивали экспрессию гена и белка SSPN в мышечных клетках мышей и человека с дефицитом дистрофина. Ведущее соединение ОТ-9 увеличивало локализацию на клеточной мембране компенсаторных ламинин-связывающих адгезионных комплексов и улучшало стабильность мембран в мышечных трубках МДД. Мы продемонстрировали, что эффект стабилизации мембраны зависит от SSPN. Внутримышечная инъекция ОТ-9 у мышиной модели МДД увеличивала экспрессию гена SSPN.
Выводы: это исследование определяет фармакологический подход к лечению МДД и определяет путь для разработки методов лечения на основе SSPN.

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/

Архив новостей